荧光免疫测定提取技术和应用：生物/医学和环境/法医学
J. Wu , HX Ju , 综合采样与样品制备, 2012
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荧光免疫测定
荧光免疫分析( FIA) 使用荧光标记进行分析物检测。由于背景荧光和猝灭问题，这种方法的检测限往往很高。这些问题限制了使用传统荧光探针的方法的灵敏度，但已通过使用时间分辨荧光来克服，这使得检测限低得多的检测方法得以开发。时间分辨荧光的原理是利用激发后背景荧光衰减较快的优势，因此在背景荧光衰减到可以忽略不计的水平后进行测量，而探针的荧光仍然很高。
释放荧光免疫测定分别利用通过酯或糖苷键与荧光团（例如香豆素衍生物）结合的抗原或半抗原。由于取代基的猝灭效应，该缀合物是非荧光的。由抗体结合催化的键水解释放荧光团。
一个特殊的变体代表酶水解抗体保护的 FIA，称为底物标记的 FIA。这种方法不能与酶标记的荧光免疫测定法 (ELFIA) 混淆，它基于通过添加酶来切割糖苷键，从而释放荧光团（方案 2）。
与 ELFIA 相反，抗原用荧光团标记并以有限的浓度存在，而酶是游离的并过量使用。分析物和底物标记的半抗原竞争抗体上的结合位点。酶无法接触到与抗体结合的偶联物。
